近年来，外泌体因来源广泛、结构稳定、包裹内容物丰富且在细胞间信息与物质传递中扮演重要角色而被认为是极具潜力的肿瘤诊断标志物以及药物递送的优质载体，也因此其在国自然研究领域持续多年成为研究热点。
外泌体来源包括体内（血清，血浆和各类体液）、以及体外细胞培养上清。其中体外细胞培养上清因其易获取，且批次间样本质量稳定，易推动后续深入体外功能和机制研究而成为广大科研工作者青睐的首选之一。
在外泌体研究--细胞大规模扩培获得细胞培养上清过程中，小编发现大家常常面临不同细胞对于无外泌体专用完全培养基的适应度不同，而导致细胞形态改变或者细胞死亡漂浮等情况；以及在细胞大规模扩培过程中，如何保证细胞铺板均匀和长到理想生长密度时收集细胞培养上清等问题。接下来小编为大家一一讲解分享。
细胞驯化篇
在实验过程中，小编发现不同细胞对于无外泌体专用完全培养基的适应度不同，有些细胞的生长状态并不会因为培养基的更换而受到影响，但是有的细胞会因此而发生形态改变或者死亡漂浮。在这里小编建议大家，在做正式实验之前，要先进行预实验，用无外泌体专用完全培养基对细胞进行驯化，如在细胞不同的生长密度下，加入不同比例的无外泌体专用完全培养基，让细胞有一个渐进适应的过程，这样在更换成100%无外泌体专用完全培养基时，细胞才不会因为培养环境变化太快而影响生长状态。以下为大家展示天津舍为斯生物技术有限公司用无外泌体专用培养基培养细胞时的细胞状态，大家通过照片可以看到经过驯化，在100%无外泌体专用完全培养基环境下细胞的状态还是很不错的。
细胞铺板和收集篇
对于体外实验外泌体的综合研究，其中细胞培养上清的大规模富集和后续外泌体的大规模提取是我们必做的实验操作之一。对于细胞的大规模扩培，很多实验人员可能考虑选择75T或者更大的培养瓶去培养细胞。但经过我们多次实验对比发现，用培养瓶去做细胞大规模扩培，往往带来实验生产效率低下，且实验周期拉长（并因为实验周期拉长带来其他不可控风险）等问题。所以我们采用的实验方法是选用15cm皿去做细胞大规模扩培工作，这种方法操作简单易重复，且可快速高效实现细胞的大规模扩培和细胞培养上清收集工作。
在细胞大规模扩培和铺板过程中，要格外注意细胞铺板的均匀性（建议选择十字摇匀法进行均匀铺板），这对于细胞贴壁以及均匀生长是比较重要的。因为一旦铺板不匀，会导致培养皿中部分区域细胞高度富集，部分区域细胞确零星分布等问题，这会对后续细胞上清收集和外泌体提取产生一定负面影响。
当我们从培养皿中收集齐细胞培养上清后进行初级培养上清纯化时，首先要通过低速离心去掉细胞、细胞碎片及其他杂质；之后再经过二级纯化，采用不同转速，两次离心后吸取合并上清，既可获得纯净而含有外泌体的细胞培养上清，以上操作完成后将收集好的细胞培养上清放进-80℃冰箱冻存以备后用。
外泌体的提取和鉴定篇
目前常用的外泌体提取方法包括超速离心法和外泌体提取试剂盒提取法，以上两种方法天津舍为斯生物技术有限公司均可提供成熟的技术服务。外泌体抽提后为了检测外泌体抽提体系准确无误，需要针对同批次外泌体，抽样做外泌体鉴定。常规外泌体鉴定包括三个维度，分别为：电镜鉴定，粒径鉴定，以及外泌体标志物的wb鉴定。具体鉴定结果demo见下图：
以上是小编为大家准备的大规模细胞培养上清外泌体富集实验技巧，仅供大家参考。希望大家在开展相关实验时，能够就此有所启发，尽量少走一些弯路。如果您有这方面的需要，欢迎您联系我们（电话15302060382）。
