实验干货|大小鼠表皮组织qPCR的操作技巧

2022 / 09 / 063059

编者说 /



在模式生物如大小鼠的表皮研究工作中,很多科研工作者在做qPCR实验的时候会遇到各种各样的问题,通过与这些科研人员进行交流,发现他们的问题主要集中在以下几点:样本前期处理、qPCR试剂及内参的选择等问题。下面小编为大家进行梳理,希望能助力大家更高效的完成实验。

样本的前期处理

由于表皮组织的特殊性,在前期处理样本时要注意把表皮组织上的毛发刮干净,并尽可能地避免皮下组织的黏连(以免其他组织对表皮组织的结果造成影响),样本处理好之后用PBS冲洗两遍,尽快置于-80℃冰箱低温保存,在邮寄的过程中要保证干冰量的充足。另外因为大鼠表皮组织相对于肌肉组织和内脏组织来说更难研磨,所以小编建议大家在研磨表皮组织的时候要适当增加研磨时间、次数以及力度(低温研磨),大家也可以根据需要尝试短时间低温冷冻后再研磨。

qPCR实验中的注意事项


在做qPCR的实验过程当中比较重要的一个问题是内参的选择,因为不同内参在不同物种以及组织当中的适用度以及稳定性不同。小编建议在做正式实验之前可通过预实验筛选内参,以便于后续实验的开展。另外在与其他科研工作者交流后发现很多人得到的qPCR结果中会出现熔解曲线多峰,以及扩增曲线的CT值靠后的情况。这些情况的出现有时并非是因为引物的特异性差,也可能是试剂的选择不当或者退火温度设定不合适引起,这需要大家对实验条件进行反复摸索。接下来给大家进行举例说明。



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上图为选用β-actin为内参时得到的曲线图结果,经过对内参进行筛选,最终我们发现内参选用α-Tublin更适合(见下图)。


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以下展示的是针对目的基因曲线不佳的情况,我们在对实验细节调整后大家可以看到后期的结果是比较好的。

调整前:


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调整后:

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对于特殊组织样本qPCR实验结果的成功取决于多个细节。提醒研究皮肤疾病的科研工作者们要通盘考虑。做好每个实验细节的把控,进而保证实验的高效完成。

       以上就是小编为大家整理的大鼠表皮组织样本qPCR实验过程中的注意事项以及操作技巧。目前天津舍为斯生物技术有限公司已具备较为成熟的各种特殊组织和样本的qPCR实验操作体系(如难操作的血液样本,表皮组织等),输出结果稳定可靠,欢迎有相关需求的科研工作者联系咨询。(联系方式:15302060382)。


      总而言之,qPCR实验从RNA提取到反转定量虽步骤简单,但问题也是层出不穷,希望大家在遇到问题时不要慌乱,找到适合自己的解决方法实验才能稳步进行。在这里天津舍为斯生物技术有限公司,为各位提供专业优质的qPCR实验服务,小编在这里为大家呈现本公司的产品优势,如果感兴趣并且想要了解,欢迎大家来电咨询。


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