背景介绍 /
1)定义：外泌体是由细胞(淋巴细胞、树突状细胞、肿瘤细胞等)主动向外界环境中分泌的包含RNA和蛋白质等生物活性物质的纳米囊泡结构(30-150 nm)。在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。
2)功能：外泌体被认为具有细胞间信使递送的功能，主要有两种作用方式。一是直接作用，外泌体表面的蛋白分子或脂质配体直接激活靶细胞表面的受体，产生信号复合体并激活胞内信号通路。二是递送作用，外泌体可以与靶细胞的质膜融合或内吞直接进入细胞，将自身携带的蛋白质、核酸、脂质等活性分子带到细胞内，进而调控细胞的功能及生物学行为。以此在体内参与细胞通讯、细胞迁移、血管生成和抗肿瘤免疫等生理过程。
3)优势：外泌体作为一种无细胞系统存在，具有一些细胞治疗不具备的优势，如体积更小、更单一、循环半衰期长、低免疫源性、很容易包被治疗物质、易穿过血脑屏障、易生产及贮存，同时无致瘤性等，使其日渐成为再生医学及生物医学治疗的新选择。
外泌体提取的方法和技巧
1). 乳液中外泌体的提取
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统的超速离心法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。因此，天津舍为斯生物技术有限公司自主研发了一款乳液的外泌体快速提取试剂盒。该试剂盒适用于乳液中的外泌体抽提，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。具体提取方法如下：
(1) 产品组成
组分名称 | 规 格 |
Solution A | 50 mL |
Solution B | 50 mL |
Solution C | 50 mL |
Solution D | 100 mL |
50 mL 离心过滤柱 | 20 个 |
(2) 实验流程
(3) 实验细节
a. 整个操作过程中，要对样品进行冰浴，离心时要保证4℃离心。
b. 在乳液脱脂的过程中，离心后上层状态应为 “致密、稳定、不易脱落” ，若上层 “松软、易脱落” 且下层沉淀较多，可继续重复此步骤，每次离心取中间层液体。
c. 在乳液澄清过程中，向乳清中加入 Solution A，将离心管颠倒混匀至呈现 “半透明状” ，再加入 Solution B ，颠倒混匀后于2℃至8℃静置10min；静置完成后轻轻晃动离心管，呈现 “豆花状” 固体，液体部分为 “透明状” 。若未呈现 “豆花状” 或样品仍为 “乳白色” ，可再次适当加入 Solution B 至液体为 “透明状” 。
d. 在外泌体提取过程中，向上清液中加入Solution D混合均匀后至少静置2 h，在此过程中，增加静置时间可提高外泌体得率，但静置时间不可超过24 h。
(4) 注意事项
a. 本品在室温条件下可稳定保存24 个月，使用前请充分混匀。
b. 本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！
c. 更多技术问题，请联系公司技术支持为您作进一步解答（详情请见文末）。
2) 外泌体的鉴定
用上述方法提取出来的外泌体是否合格?怎么进行验证呢?下面为大家介绍鉴定外泌体提取合格与否的三大法宝：电镜、NTA粒径和Western blot检测。
a. 电镜：可以观察样品中是否有与外泌体相似的经典结构，有经典结构说明样品中有外泌体或者与外泌体类似的，如溶酶体、蛋白聚团、支原体等结构。
b. Western Blot：WB检测发现样品中具有外泌体的标志物，可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情况。
c. NTA粒径：电镜和WB的连用只能证明样品中有外泌体，但是有多少、纯度等就不得而知了。所以这个时候需要再来一个NTA实验，NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征，以达到跟电镜和WB相辅相成的作用。
3) 其他产品服务
上述主要阐述了从乳液中提取外泌体的实验方法，本公司同时可承接从血液、唾液、尿液、脊髓液等体液或细胞培养上清中提取外泌体的抽提纯化项目，并可对所提取的外泌体进行鉴定，包括但不限于SEM/TEM/ATM观察、电泳WB检测、外泌体示踪、酶联免疫等。
3. 宗旨理念
a. 实验过程及结果能够保证绝对真实，原始数据全部反馈给客户。
b. 实验过程全部有据可循，拍照留存，实验数据能够保证真实有效。
