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本公司在双荧光素酶实验验证ceRNA机制、转录因子与启动子调控机制方面有夯实的理论基础和丰富的实践经验。下面对这两个方面进行详细的阐述。
1)双荧光素酶实验验证-ceRNA机制

双荧光素酶报告基因实验是通过将预测能够与miRNA结合的靶基因3’UTR序列插入载体中F-Luc的3’UTR。当我们感兴趣的miRNA和质粒中的插入序列结合后，miRNA会通过和所插入的序列结合从而抑制萤火虫荧光蛋白的翻译最终造成荧光值的下降。R-Luc可以作为内参来去除组间的转染效率差异。

a. 原理流程图：

b．研究思路：

eg：发表在“Mol Cancer”期刊上的一篇论文“Circ-ZEB1 promotes PIK3CA expression by silencing miR-199a-3p and affects the proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma.”，作者首先通过FISH实验及在线预测，验证了circRNA circ-ZEB1与miR-199a-3p的靶向关系，又利用双荧光素酶报告基因检测实验验证了miR-199a-3p与PIK3CA的靶向结合，针对PIK3CA的结合位点构建了野生型及突变型载体质粒，在野生型中通过报告基因的表达变化，间接反应了二者的结合。综合全文共同探究出了circ-ZEB1---miR-199a-3p---PIK3CA轴对肝癌进展的干预作用。结果如下：

c. 实验细节：

1. 获取基因信息：确认基因ID，明确互作关系，获取基因序列。

2. 靶基因结合在线预测服务：我们可以免费提供miRNA与靶基因，转录因子结合等在线数据库预测结果，并根据预测结果给出专业化建议。

3. 质粒的构建：根据预测的结合位点，我们可以为您设计实验方案，构建相应的野生型及突变型质粒，可直接用于细胞实验验证。

4. 专业的双荧光素酶结合验证实验服务：设置详细的分组，严格的复孔重复，选择稳定性一流的检测试剂，为您提供真实严谨的实验结果和数据分析。

2) 双荧光素酶实验验证-转录因子与启动子调控机制研究

转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，这些特异性的序列被称为顺式因子。转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强作用。双荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

a. 原理流程图：

b．研究思路：

eg：发表在“Gut”期刊上的一篇论文“Localisation of PGK1 determines metabolic phenotype to balance metastasis and proliferation in patients with SMAD4-negative pancreatic cancer.”，作者通过双荧光素酶报告基因检测，突变了PGK1启动子区潜在结合元件，发现TGF-β/SMAD4对PGK1转录活性的抑制，确定了SMAD4在PDAC细胞中可作为糖酵解酶PGK1的转录因子，从而调节糖酵解和侵袭性肿瘤行为。进一步创新性的发现了PGK1在SMAD4阴性PDAC患者中是一个决定性的致癌基因，可以作为开发SMAD4阴性PDAC治疗策略的靶点。结果如下：

c. 实验细节：

1. 结合位点预测：Ensembl (grch37.ensembl.org/inde.);

JASPAR: https://jaspar.genereg.net/。

2. 检测试剂的升级：E2920（均质法辉光型 (-Glo)）。

3. 数据分析：用归一化值消除实验差异带来的影响。

宗旨理念