实验干货|免疫共沉淀（CoIP）实验原理及应用_新闻中心

免疫共沉淀与免疫沉淀技术所使用的原理与方法大致相似，所不同的是，在免疫共沉淀中，对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基础上，通过进一步与其它技术的结合，如聚丙烯酰胺凝胶电泳，还可进一步对靶蛋白的的分子量等特性进行鉴定。下面对此进行详细介绍。

实验原理

(1)免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗体特异性反应，对某个特定蛋白纯化富集的方法，主要过程包括捕获和固定。

(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP实验的基础上进行的扩展，主要用于蛋白之间的互作研究，常被用于鉴定特定蛋白复合物的中已知或未知的蛋白组分。其原理是基于抗体与抗原（靶蛋白）之间的特异性结合，此时如果样品溶液中存在能与靶蛋白相互作用的目的蛋白，会一同被拉下来，随后利用SDS-PAGE，Western Blot等方法对得到的目标蛋白进行分析，进而证明两者间的相互作用。

关于实验

1、CoIP的实验操作流程

2、注意事项
＊确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白，单克隆抗体具有特异性强、可大量生产、易标准化等优点，使用单克隆抗体有助于避免污染的发生；
＊要确保抗体的特异性，如果抗体不能和细胞溶解物中的抗原结合，则不会引起共沉淀反应;＊确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是由于细胞的溶解才发生的。
3、实验技巧

为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用，而不是由于某些方面造成的人工相互作用（也就是“假阳性”），在Co-IP 的实验设计过程中，需要设置正确的对照。假设Co-IP 实验的实验组为“磁珠+抗X 抗体+靶蛋白X+目的蛋白Y”，则可能出现的“假阳性”及对应需要设置的实验对照如下表所示：

4、CoIP实验结果解读

Lgr5-mediated p53 Repression through PDCD5 leads to doxorubicin resistance in Hepatocellular Carcinoma（IF：11.600）

western blotting结果显示，在共转染Flag-Lgr5和Myc-PDCD5的细胞中，抗flag抗体能免疫沉淀Flag-Lgr5/Myc-PDCD5复合物，而在仅转染Flag-Lgr5的细胞中，抗flag抗体不能免疫沉淀Myc-PDCD5。抗Lgr5抗体可以检测抗PDCD5沉淀的免疫复合体中的Lgr5，而不能检测IgG抗体。抗Lgr5抗体的免疫沉淀也证实了Lgr5和PDCD5之间的相互作用。

我们的优势

＊实验数据真实可靠，有据可循

＊提供详细专业的实验报告与数据分析

＊严格设置实验分组，保证实验结果的完整性

天津舍为斯生物技术有限公司是国内领先的转化医学研究、生物医药研究、临床医学CRO（研发外包）研究的高新科技企业。公司致力于打造公共技术服务、生物医药研发和临床医学CRO服务为主体的三位一体健康医疗产业联盟。公司基于近10年的客户服务体验及技术经验积累，为基础科研、转化医学、新药研发等医药科研类客户提供专业化的技术服务及共享实验平台。公司拥有专业化的实验室及一流的实验设备，拥有独立的细胞培养室、分子生物学实验室，以及经认证的SPF级别的动物饲养中心。

舍为斯优势服务推介：细胞、基因调控工具（siRNA小干扰，质粒，病毒），稳转株，细胞检测（CCK8，凋亡，周期，划痕，transwell等），分子检测（qPCR，wb，RIP，CUT&tag，RNA pull down，GST-pull-down），双荧光素酶报告基因检测，小动物实验（裸鼠荷瘤，原位瘤，转移模型，各种疾病模型），蛋白质组学检测服务等。

如实验需要协助，欢迎随时联系我们沟通方案！

天津舍为斯生物技术有限公司

Tianjin Sheweisi Co.，Ltd.

电话:15302060382

邮箱:sws001@sheweisi.com.cn

网址:www.sheweisi.com.cn

地址：天津市滨海新区洞庭路220号(国际生物医药联合研究院实验楼N212室)

# SUMMARY

长按识别二维码

天津舍为斯生物技术有限公司