实验干货|染色质免疫沉淀法（ChIP)实验原理及应用_新闻中心

背景介绍

染色质免疫沉淀 (ChIP) 是一种用于表观遗传学研究的技术，可以快速反映蛋白质-DNA 相互作用。

1、概念

染色质免疫沉淀法(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP) 是一种基于抗原抗体反应的特异性，从而起到选择性地使DNA 结合蛋白及其 DNA 靶标富集的作用，是在全基因组水平研究生命体组织或细胞内蛋白质与DNA相互作用的一种技术方法。

2、原理

首先在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后利用抗原抗体反应的特异性，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片段的纯化与检测分析，获得蛋白质与DNA相互作用的信息，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。ChIP 可用来研究某种特殊的蛋白-DNA 相互作用、多种蛋白-DNA 相互作用或全基因组或部分基因内的相互作用。

实验步骤

1、实验流程

2、ChIP实验关键步骤
1）细胞的准备及固定

细胞在培养皿上生长到80% ~90%。当第一次做实验时，可以同时准备两个培养皿，一个用于预测细胞数量（细胞量最低为105），另外一个用于优化超声条件。
2）染色质超声断裂

加入SDS裂解溶液重悬沉淀，在冰上放置10 min,每隔1 min颠倒摇动离心管。SDS能裂解细胞膜和核膜，使固定染色质释放出来，这样有利于超声。
3）免疫沉淀蛋白和DNA复合物

所有染色质免疫沉淀步骤都必须低温（冰上或 4℃）操作。

使用ChIP稀释溶液把超声染色质液体稀释10倍，这样有利于免疫沉淀反应。为了减少非特异性结合蛋白背景，往2 mL超声稀释液中加入20μL蛋白A/G琼脂糖珠（Protein A/G Agarose Beads),在4℃摇床轻柔摇动1 h。
4）洗脱、解交联

从这一步开始，所有操作都在室温进行。

在洗脱步骤完成后吸取洗脱上清时要格外注意，防止吸走微珠而造成样品污染。同时要注意每个样品管吸取等量的上清，防止造成样品间误差。
5）DNA 纯化

DNA纯化可以通过酚/氯仿抽提或者通过硅胶柱纯化。
6）鉴定

一旦完成了 DNA 纯化，便可进行多种下游分析，包括ChIP-PCR、ChIP-qPCR、ChIP-芯片和ChIP-seq。

3、文献分析

Hypoxia induces H19 expression through direct and indirect Hif-1α activity, promoting oncogenic effects in glioblastoma

作者分别使用了两种细胞U87和U251，验证SP1对于H19的转录调控作用。用SP1抗体进行ChIP实验。富集到的DNA进行qPCR检测，结果显示SP1能够调控H19启动子的转录。

我们的优势

1）实验数据真实可靠，有据可循

2）严格设置分组，保证结果的完整性

3）出具详细的实验报告及数据分析

CHIP实验步骤繁杂，即使是专业科研人员，也容易出现各种问题，扰乱实验进程，天津舍为斯生物技术有限公司拥有丰富的经验，并具有稳定的操作体系，竭诚为您服务。

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