AAV动物实验| 如何选择合适血清型和注射方法?

1970 / 01 / 012008

AAV作为新一代基因治疗载体前景广阔,其中很重要的原因在于其特异性强。得益于AAV的不同血清型,每种血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力,配合以合适的注射方法,会取得更好的效果。如果您做动物实验,建议首选AAV。

先说说AAV血清型,目前已经有数十种血清被发现,每种血清型对不同组织器官细胞的亲和性如下:

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再看AAV注射方法,AAV注射方法主要可以分为系统性注射和原位注射。系统性注射方法常见的有尾静脉注射,腹腔注射;原位注射即局部注射,根据需要在不同部位进行注射,比如脑立体定位注射。

很多研究表明,不同血清型病毒,即便使用相同的注射方法,其组织分布也是不同的。以文章“Analysis of AAV Serotypes 1–9 Mediated Gene Expression and Tropism in Mice After Systemic Injection”为例:

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这篇文章使用不同的AAV血清型1-9,用AAV-CMV-Luc病毒,并使用相同注射方法-尾静脉注射,9个月后对荧光素酶活性进行检测,检测结果表现出三种不同的表达水平:

1. AAV2,3,4,5为Low-expression group(a),表达范围为5,000–25,000 photons/second/cm2;

2. AAV1,6,8为Medium-expression group,表达范围为15,000–200,000 photons/second/cm2;

3. AAV7,9为High-expression group(c),表达范围为10,000–1,000,000 photons/second/cm2;

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同时在解剖的组织评估蛋白表达和病毒基因组拷贝数情况,AAV9具有最佳的病毒基因组分布和最高的蛋白质水平,所以AAV作为最广谱的血清型,感染全身效果都是极好的。AAV7在肝脏中与AAV9相当。而AAV4在肺和肾里有最高的病毒基因组分布,在心脏中也有较高水平分布。AAV6则在心脏、肝脏、骨骼肌中有观察到。

下图为Luciferase蛋白表达水平不同血清型的表达情况:

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那么问题来了,不同器官组织,如何选择合适的血清型和注射方法呢?

本期根据文献整理了常见组织器官推荐的血清型和注射方法以及不同部位注射病毒量供大家参考(注:不同文献中各组织最适血清型可能存在差别,同时注射方法可能因为实验目的而不同)。

表1:常见组织器官推荐的血清型和注射方法

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表2:不同注射部位所需病毒量及检测时间参考

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表3:注射器材选择参考

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